Wat is SYBR Green®?

SYBR Green® is een fluorescerende kleurstof die bindt aan DNA verdubbelen met grote specificiteit. Het wordt veel gebruikt in moleculair biologisch onderzoek te kwantificeren en visualiseren dubbelstrengs DNA. SYBR Green® is een synthetische kleurstof, die in de vroege jaren 1990 werd geïntroduceerd door Molecular Probes & reg, Inc., een dochteronderneming van Invitrogen & trade Corporation. Het is een asymmetrische cyaninekleurstof, cyaninen zijnde een familie van synthetische organische kleurstoffen die worden gebruikt in de fotografie, CD-R en DVD-R media, en van moleculaire biologie onderzoekstoepassingen.

Diverse eigenschappen maken SYBR Green® bijzonder bruikbaar als een nucleïnezuur vlek. Het is stabiel over een bereik van temperaturen, waardoor het gebruikt kan worden om biochemische reacties die plaatsvinden bij hoge en lage temperaturen controleren. Het bindt niet covalent aan het oppervlak van DNA, wat betekent dat het niet zal interfereren met de activiteit van de meeste nucleasen en DNA polymerasen. Het bindt eveneens nucleïnezuren over een dynamische lineaire bereik tot vier orden van grootte, zodat het kan een nauwkeurige kwantificering van DNA geven over een breed bereik van concentraties.

De meest voorkomende laboratoriumtoepassingen van SYBR Green® zijn dubbelstrengs DNA gedetecteerd in real time polymerase-kettingreactie (PCR) en acrylamide gels. PCR is een techniek om een ​​aantal kopieën van DNA te amplificeren door herhaalde cycli van DNA-replicatie. Real time PCR meet de amplificatie als het plaatsvindt en omdat SYBR Green® bindt aan DNA dubbele meten van de fluorescentie-emissie van de DNA-kleurstof complex kan de onderzoeker de hoeveelheid DNA geproduceerd kwantificeren. Omdat PCR cycli vooruitgang is er een toename in fluorescentie verhouding tot de hoeveelheid PCR product verkregen.

Acrylamidegelen zijn alomtegenwoordig in de moleculaire biologie laboratoria, als zij dienen de vaak nodig, af te scheiden DNA-fragmenten op grootte. SYBR Green® stelt de onderzoeker om DNA te visualiseren in een acrylamidegel door stralend licht van de juiste golflengte op. Andere toepassingen van SYBR Green® omvatten detectie van nucleïnezuren in oplossing, in biochip toepassingen, en in flow cytometrie. De DNA-kleurstof complex absorbeert blauw licht bij 488 nm en emitteert groen licht bij 522 nm.

SYBR Green® is zeer gevoelig; is 25 maal gevoeliger dan ethidium bromide, andere gewoonlijk gebruikte kleurstof voor het visualiseren van DNA. De hoge affiniteit van SYBR Green® voor dubbelstrengs DNA maakt het nuttig voor het detecteren van monsters van DNA met een klein aantal kopieën. Het bindt bij voorkeur dubbelstrengs DNA, maar het kan ook enkelstrengs DNA met verminderde fluorescentie binden. Zoals met elke DNA-bindend molecuul, kan SYBR Green® mutaties veroorzaken en is een mogelijk kankerverwekkend. Het is echter veiliger om mee te werken en gemakkelijker te verwijderen dan ethidiumbromide.

  • SYBR Green wordt DNA in moleculair biologisch onderzoek.